技术原理
研究细胞模型中Sirt5的底物或琥珀酸盐的作用时,通常采用稳定同位素标记培养基中的氨基酸(Lysine),同时结合抗体富集、高分辨率质谱的方法分析不同处理细胞系中的琥珀酰化组,并通过肽段一级谱图获得相对定量信息。
技术优势
1. 采用体内标记技术,几乎不影响细胞的功能
2. 灵敏度高,且定量信息准确
实验流程
参考文献
[1] MJ Rardin, H Wenjuan, N Yuya, et al. SIRT5 Regulates the Mitochondrial Lysine Succinylome and Metabolic Networks. Cell Metab. 2013, 18(6):920-933
[2] Z Shimin, X Wei, J Wenqing, et al. Regulation of Cellular Metabolism by Protein Lysine Acetylation. Science 2010, 327(5968):1000-1004
[3] D Girija, L Dmitry, K Lora, et al. The pan-HDAC inhibitor vorinostat potentiates the activity of the proteasome inhibitor carfilzomib in human DLBCL cells in vitro and in vivo. Blood 2010, 115(22):4478-4487