谷胱甘肽化的研究策略

日期:2020-07-16 21:06

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    谷胱甘肽化的研究由于缺乏比较好的富集材料,有3个可以考虑的研究思路供大家参考。

    1. 单蛋白纯化
 
    S-glutathionylation作为细胞感知和响应有害压力的重要氧化还原信号,不少传导通路都有鉴定到(如Hsp、NF-κB、Akt等)。目前报道的200多个蛋白上的谷胱甘肽化修饰位点都是采用这种方法,先纯化出目标蛋白,再完成高覆盖度的生物质谱。
缺点是目标蛋白的抗体特异性比较好。
 
    2. 生物素化谷胱甘肽
 
    蛋白质通过与生物素化谷胱甘肽形成的混合二硫键与亲和素结合,在还原剂洗脱后即可通过LC-MS完成谷胱甘肽修饰组学的研究。
优点是不需要对单蛋白进行富集可以完成对一次性完成所有蛋白质的谷胱甘肽修饰鉴定。缺点是费用相对高、且对质谱的分辨率及鉴定技术有较高的要求。
 

 
   
    3. 谷胱甘肽转移酶靶点
 
    该修饰的产生和数量主要涉及到谷胱甘肽S-转移酶、谷氧还原酶等酶类。如果能够通过WB确认该酶类发生数量变化,可以通过定量蛋白质组学完成该酶类的调控底物鉴定,确定哪些蛋白发生了谷胱甘肽化修饰。
缺点是修饰位点只能通过motif或蛋白结合位点进行预测。
 
    另外有发射性标记法等途径,与生物素化的思路一致,但是存在假阴性且实验路线更为繁琐,简略如下图所示。