针对常规蛋白蛋白定性检测推荐
方法一：直接电泳
1. 免疫沉淀反应后，在4 °C 以3,000 g速度离心5 min，将protein A/G-beads离心至管底；将上清小心吸去，protein A/G-beads用10 mM的Tris-Cl缓冲液洗3－4次；最后加入15 μl的2×SDS 加样缓冲液，沸水煮10 min；
2. SDS-PAGE, 考马斯亮蓝染色脱色后，切取相应胶条，胶内酶解后进行质谱分析。
针对常规蛋白定量检测方法推荐
方法二：甘氨酸洗脱
1. 用10 mM的Tris-Cl缓冲液把Beads洗3次，3,000 g速度离心5 min，尽量吸尽洗涤液；
2. 加入洗脱缓冲液（0.2 M Glycine, 0.15% NP40，pH 2.3），一般50 µL的beads 需加入75-100 µL洗脱buffer;
3. 室温震荡洗脱 10 min；
4. 2000 g离心2 min，吸取上清到新的EP管中；
5. 重复step2~4洗脱两次（若洗脱后杂带太多，可适当增加洗脱液体积或者加大原始样品蛋白量）；
6. 取十分之一的洗脱样品跑胶银染检查样品洗脱情况；
7. 测定蛋白浓度，取等量蛋白进行trypsin酶解脱盐后，可进行质谱上机。
方法3：8 M尿素洗脱
1. 用10 mM的Tris-Cl缓冲液把Beads洗3次，3,000 g速度离心5 min，尽量吸尽洗涤液；
2. 加入洗脱buffer（100 mM Tris-Cl ,8 M Urea pH8.0）, buffer体积由beads量决定，一般50 µL的beads 需加入100 µL 洗脱buffer；
3. 将混合物室温震荡洗脱15 min；
4. 2000 g离心2 min，吸取上清到新的EP管中；
5. 重复2-4步骤一次；
6. 取十分之一的洗脱样品跑胶银染检查样品洗脱情况；
7. 测定蛋白浓度，取等量蛋白进行trypsin酶解脱盐后，可进行质谱上机。
